橡胶树新发茎杆溃疡病病原鉴定其生物学特性测定,本论文为免费优秀的关于生物学特性论文范文资料，可用于相关论文写作参考。
生物学特性论文参考文献：
摘 要 2014至2015年,对海南省橡胶树主栽区的病害普查中发现1种新的茎杆溃疡病.该病在海南省部分农场发生严重,为害中小龄胶树和开割树的茎杆,造成树皮隆起并呈褐色,严重时流出白色胶乳,对橡胶树的长势和产胶量造成重要影响.通过形态观察、rDNA-ITS序列比较和聚类分析结果表明,分离自不同地点的8株病原菌均为茄类镰刀菌（Fusarium solani）.菌株HHNBS01的生物学特性表明,CMA、PDA和Czapek培养基中,以蔗糖和硝酸钾为碳源和氮源,30 ℃,pH6为菌落生长最适条件,15 ℃,pH6,完全黑暗,D-木糖和草酸铵分别为碳源和氮源是产孢最适条件,30 ℃,pH7为分生孢子萌发最适条件,而菌丝和分生孢子的致死温度均为60 ℃ 10 min.
关键词 橡胶树；茎杆溃疡病；茄类镰刀菌
中图分类号 S763.7 文献标识码 A
橡胶树（Hevea brasiliensis）为大戟科（Euphobiaceae）橡胶树属（Hevea）的多年生热带雨林乔木树种,原产于南美洲巴西亚马逊河流域,其所产生的天然橡胶和石油、煤炭、铁矿并称世界四大工业原料,广泛运用于农业生产、国防、交通运输、医药卫生和日常生活等方面[1].1904年,橡胶树首次引入中国云南地区.新中国成立后,天然橡胶产业获得了迅速发展,种植范围扩大至整个热区,目前已经成为当地农业经济的重要支柱.中国的橡胶树种植面积居世界第三[2],但橡胶产量不能自给,自2002年起,一直是世界上最大的进口国[3],2014年中国橡胶产量为85万t,进口量高达381万t.随着中国经济及国防事业的快速发展,供需缺口不断扩大,使得天然橡胶在国民经济中的战略物资地位越来越重要.
然而在橡胶产业发展过程中,由生物因子引起的各种病害一直是影响其产量的重要因素之一,危害橡胶生产的病害主要有叶部病害（如 病[4]和炭疽病[5]）、根病[6]（如红根病和褐根病）、茎干病害（如绯腐病[7]）和割面病害（如条溃疡[8]）等.2014年至2015年,笔者对海南省主要橡胶树种植区的病情调查中发现部分橡胶农场新发生一种茎杆溃疡病,该病为害中小龄胶树和开割树,造成茎杆溃疡,严重时流胶并出现枝杆枯死现象.前人认为可可球二孢（Botryodiplodia theobromae Pat）能够为害橡胶树茎杆并引起流胶病[9],但缺乏原菌鉴定等方面研究.肖永清等[10]、李加智等[11]认为疫霉菌、镰刀菌能够为害胶树茎杆并产生流胶现象,但同样缺少研究.本研究开展了该新发病害的病情调查、病原菌鉴定及基础生物学特性测定工作,为开展进一步的防治技术研究提供基础.
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 橡胶树品种和茎杆溃疡病病样 橡胶树品种为PR107,由中国热带农业科学院橡胶研究所提供.橡胶树茎杆溃疡病病样采集自海南儋州、万宁、白沙等地的橡胶农场（见表1）.
1.1.2 供试试剂 DN 段回收试剂盒和 pMD18-T载体购自宝生物工程（大连）有限公司；Taq酶、dNTP和Escherichia coli DH5α感受态细胞购自天根生化科技（北京）有限公司；参照Cooke等[12]的报道设计引物ITS1和ITS4,由北京六合华大基因科技有限公司合成引物；其它试剂均为国产分析纯.
1.1.3 供试培养基 PDA、Czapek、PSA、OMA、CMA、胡萝卜、麦芽膏琼胶等培养基的配方参照《植病研究方法》[13].橡胶枝煎汁培养基：新鲜橡胶枝条200 g,琼脂16 g,水1 000 mL.
1.2 方法
1.2.1 病害调查 调查时间为2014年6月和9月,2015年4月.调查地点为海南省橡胶树主栽区.
1.2.2 病原菌分离和致病性测定 在发病橡胶树上采集典型病样,参照《植病研究方法》的方法[13]进行病原菌的分离和纯化.按照柯赫法则进行病原菌致病性测定：接种试验于2014年8月在海南省海口市演丰镇进行.各病原菌在PDA平板上培养7 d后,用无菌打孔器在菌落边缘打取菌饼（Φ 5 mm）.选用健康的橡胶树实生苗（2龄）,对茎干进行表面消毒后,用无菌的大头 树皮,每株设3个接种点（两点之间相距约25 cm）,接种菌饼后进行保湿处理,以同样大小的PDA培养基块为对照.每个菌株选择10株橡胶树,其中5株接种,另外5株为对照,接种后进行常规管理.15 d后开始观察发病情况,之后每隔7 d观察1次发病情况.接种部位发病后,重新进行病原菌的分离工作,观察菌落特征、分生孢子形状并和最初分离的菌株进行比较.
1.2.3 病原菌鉴定 形态观察：将病菌接种于PDA平板,28 ℃培养7 d后观察病菌菌落形态和色素产生情况.取少许菌丝并制备孢子液,用Nikon Eclipse 80i显微镜（Tokyo, Japan） 观察产孢结构和分生孢子形态.用附带的 ACT-1软件测量分生孢子的长度和宽度.共测量100个,求其平均数,重复3次.
ITS序列比较和系统发育树分析：采用CTAB方法[14]提取病原菌总DNA,参照White等[15]方法进行ITS序列的扩增和克隆.每个菌株随机挑选3个阳性克隆送北京六合华大基因科技股份有限公司进行序列测定,确认序列后在http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST上进行比较分析.在NCBI数据库中筛选已公布的其它致病性镰刀菌菌株ITS序列（见表1）,采用软件Mega 5.0中的NJ（Neighbor-Joining）法对镰刀菌的ITS序列进行系统发育树分析[16].
1.2.4 病原菌生物学特性研究 将供试菌株在PDA平板上28 ℃培养5 d,用无菌打孔器在菌落边缘打取Φ 5 mm的菌饼备用.在直径9 cm的培养皿中倒入20 mL融化的培养基,制备同样厚度的平板,在各平板 接种菌饼进行培养.培养基设PDA、Czapek、PSA、OMA、CMA、麦芽膏琼胶培养基、胡萝卜培养基和橡胶枝煎汁培养基等7个处理,温度设10、15、20、25、28、30、35、40 ℃等8个处理,pH值设4、5、6、7、8、9、10、11、12和13等10个处理,光照设全黑暗、全光照（4 400 lx）和光暗交替（光照和黑暗各12 h）3个处理,碳氮源设蔗糖、葡萄糖、D-木糖、D-山梨醇、D-半乳糖、D-果糖、D-麦芽糖和硝酸钾、硝酸钠、 、硫酸铵、氯化铵、草酸铵等处理（分别用等量的碳氮源代替Czapek培养基中的蔗糖或硝酸钠,以不加碳源（氮源）的Czapek培养基作为对照）.各处理均设3次重复,培养5 d后用十字交叉法测量菌落直径,7 d后用5 mL无菌水将菌落表面孢子洗下,镜检并计算产孢量.参照沈丽淘[17]和杨永利等[18]的方法测定温度和pH对孢子萌发率的影响以及菌丝和分生孢子致死温度的测定.用SAS 9.0软件对所获数据进行统计和分析.
结论：关于本文可作为生物学特性方面的大学硕士与本科毕业论文生物学特性包括哪些论文开题报告范文和职称论文论文写作参考文献下载。
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